Methylmalonzuuranalyse zonder droogstap en met Reversed Phase chromatografie


De Diagnotix MMA Direct Injection Kit introduceert een nieuwe LC-MS/MS workflow voor de analyse van methylmalonzuur (MMA) in plasma en serum. De methode combineert een eenvoudige monstervoorbereiding in water met directe injectie, terwijl reversed phase chromatografie op een C18-kolom behouden blijft.


Door de verdampingsstap te elimineren die normaal gesproken nodig is in MMA-workflows, maakt de methode eenvoudige automatisering mogelijk terwijl de robuustheid en stabiliteit van reversed phase LC-MS/MS scheidingen behouden blijven.


Deze aanpak maakt het voor laboratoria eenvoudig om MMA-analyse te integreren in bestaande LC-MS/MS workflows die al gebruikmaken van reversed phase chromatografie.

Conventionele MMA LC-MS/MS workflows

De meeste MMA LC-MS/MS methoden maken tijdens de monstervoorbereiding gebruik van onteiwitting met methanol of acetonitril. Hierdoor ontstaat een supernatant met een hoog percentage organisch oplosmiddel.

Onder deze omstandigheden worden sterk polaire verbindingen zoals methylmalonzuur en succinylzuur slecht vastgehouden op reversed phase kolommen. Daarom maken laboratoria doorgaans gebruik van één van twee strategieën.

Verdampen en heroplossen

Een veelgebruikte aanpak is het verdampen van methanol of acetonitril, gevolgd door het heroplossen van het monster in water.

Voordeel: Hierdoor kan reversed phase chromatografie worden toegepast, wat een robuuste chromatografische scheiding tussen methylmalonzuur en succinylzuur mogelijk maakt.

Nadeel: De verdampingsstap introduceert een extra handmatige stap en maakt volledige automatisering moeilijker

De eerste Diagnotix MMA-methode werkt met dit principe.

Directe injectie met HILIC of kation-exchange

Een tweede strategie is om het supernatant direct te injecteren met behulp van alternatieve chromatografische technieken, zoals HILIC of kation-exchange chromatografie.

Voordeel: De droogstap kan worden vermeden en de monstervoorbereiding kan eenvoudig worden geautomatiseerd.

Nadelen: Deze chromatografische technieken zijn over het algemeen gevoeliger voor variaties in de monstercompositie. Zo kunnen verschillen in zoutconcentratie tussen monsters het retentiegedrag en de piekvorm beïnvloeden. Hierdoor kunnen chromatografische prestaties variëren binnen een samplebatch. Daarnaast vereisen deze technieken vaak specifieke kolommen en mobiele fases die afwijken van de reversed phase omstandigheden die voor veel andere LC-MS/MS assays worden gebruikt.

De Diagnotix Direct Injection RP benadering

De Diagnotix MMA Direct Injection Kit combineert de voordelen van beide strategieën.

De workflow maakt gebruik van een eenvoudige monstervoorbereiding in water, gevolgd door directe injectie, terwijl reversed phase chromatografie op een C18-kolom behouden blijft. Hierdoor kunnen laboratoria de droogstap vermijden, terwijl de robuustheid en reproduceerbaarheid van reversed phase LC-MS/MS scheidingen behouden blijven.

Ontwikkeld voor routinematige LC-MS/MS laboratoria

Veel LC-MS/MS laboratoria voeren meerdere assays uit op hetzelfde instrument en maken daarbij vaak gebruik van reversed phase chromatografie met vergelijkbare mobiele fases en kolomchemie.

De Diagnotix MMA Direct Injection methode sluit daarom goed aan bij deze werkomgevingen. Omdat de assay chromatografische omstandigheden gebruikt die vergelijkbaar zijn met andere reversed phase LC-MS/MS methoden, kan deze eenvoudig worden geïntegreerd in bestaande analytische workflows.

Dit vereenvoudigt het wisselen tussen methoden, troubleshooting en systeemoptimalisatie wanneer meerdere assays op hetzelfde LC-MS/MS instrument worden uitgevoe