Een bekende analytische uitdaging bij MMA-analyse is de aanwezigheid van barnsteenzuur (succinic acid). Deze verbinding is isobaar met methylmalonzuur, wat betekent dat beide dezelfde ionen produceren in de massaspectrometer. Hierdoor is chromatografische scheiding essentieel voor een betrouwbare bepaling.

In de praktijk wordt dit probleem versterkt doordat barnsteenzuur vaak in veel hogere concentraties aanwezig is dan MMA. Zonder voldoende scheiding kan het signaal van barnsteenzuur de detectie van MMA verstoren.

Reversed phase (RP) chromatografie is de meest gebruikte techniek binnen LC-MS/MS voor kleine organische moleculen. Dit komt door de hoge robuustheid en reproduceerbaarheid. Retentietijden en piekvormen blijven stabiel, zowel tussen injecties als tussen batches.

Veelgebruikte kolommen zijn onder andere C18, C8, biphenyl en phenyl-hexyl, met mobiele fasen op basis van water en methanol of acetonitril. Omdat deze condities standaard zijn in veel LC-MS/MS-methoden, kunnen RP-methoden eenvoudig worden geïntegreerd in bestaande workflows.

Traditionele MMA-methoden maken vaak gebruik van eiwitprecipitatie met methanol of acetonitril. Dit leidt tot een monster met een hoog organisch gehalte. Onder deze omstandigheden worden polaire stoffen zoals MMA en barnsteenzuur slecht vastgehouden op RP-kolommen, wat chromatografische scheiding bemoeilijkt.

Daarom kiezen laboratoria meestal voor één van de volgende strategieën:

1. Verdamping en heroplossen
Hierbij wordt het oplosmiddel verdampt en het monster opnieuw opgelost in water.

Voordeel: goede chromatografische scheiding met RP.
Nadeel: extra handelingen en minder geschikt voor automatisering.

2. Directe injectie met alternatieve chromatografie (zoals HILIC of cation-exchange)

Voordeel: geen droogstap en goed te automatiseren.
Nadelen: gevoeliger voor variaties in monstersamenstelling, minder stabiele retentie en afwijkende chromatografische condities.

De nieuwe Diagnotix MMA Direct Injection methode combineert de voordelen van beide strategieën en vermijdt de belangrijkste nadelen.

De methode maakt gebruik van een eenvoudige waterige monstervoorbewerking, waarna directe injectie mogelijk is. Tegelijkertijd blijft reversed phase chromatografie behouden.

Hierdoor ontstaat een betrouwbare scheiding tussen methylmalonzuur en barnsteenzuur, zonder verdampingsstap en met behoud van robuuste chromatografie.

De Diagnotix MMA Direct Injection methode maakt gebruik van standaard reversed phase chromatografie. Hierdoor blijft de methode volledig compatibel met andere LC-MS/MS-analyses op hetzelfde instrument.

Omdat kolommen en mobiele fasen overeenkomen met bestaande RP-methoden, kunnen laboratoria de assay eenvoudig integreren. Dit vereenvoudigt ook troubleshooting, systeemoptimalisatie en het wisselen tussen methoden.

Betrouwbare analytische prestaties
De methode levert consistente en reproduceerbare resultaten, met stabiele chromatografie en robuuste scheiding van MMA en barnsteenzuur.

Vereenvoudigde workflow
De monstervoorbewerking is eenvoudig en snel. De verdampingsstap vervalt, wat automatisering vergemakkelijkt en de hands-on tijd vermindert.

Naadloze integratie
Dankzij standaard reversed phase condities kan de methode eenvoudig worden toegepast binnen bestaande LC-MS/MS-systemen. Dit maakt dagelijks gebruik efficiënter en voorspelbaarder.

Diagnotix kiest bewust voor transparantie in analytische methoden. In plaats van gesloten ‘black-box’ oplossingen biedt het inzicht in chromatografische principes, kolomchemie en mobiele fasen.

Dit helpt laboratoria om methoden beter te begrijpen, problemen sneller op te lossen en systemen optimaal te gebruiken, zeker wanneer meerdere assays op één instrument draaien.

Bij het implementeren van MMA-methoden zonder droogstap is het belangrijk om te controleren welke chromatografische techniek wordt gebruikt.

Methoden met verdamping maken meestal gebruik van reversed phase chromatografie. Methoden zonder droogstap maken vaak gebruik van alternatieve technieken zoals HILIC of ionenuitwisseling.

Laboratoria die met commerciële kits werken, doen er goed aan om dit expliciet te verifiëren in de instructies of bij de leverancier.

Technieken zoals HILIC en kationenuitwisseling zijn waardevolle en veelgebruikte benaderingen binnen LC-MS/MS en kunnen uitstekende resultaten leveren. Een voorbeeld is de Diagnotix Metanephrins in plasma LC-MS/MS kit.
Ze vereisen echter vaak een strengere controle van parameters zoals zoutconcentratie en monstersamenstelling om consistente chromatografie te garanderen. Reversed phase chromatografie biedt in veel routinetoepassingen een hogere mate van robuustheid en voorspelbaarheid.